蛋白質是由不同的Α-氨基酸按一定的順序通過酰胺鍵(蛋白質化學中專稱肽鍵)縮合而成的,具有較穩(wěn)定的構象并具有一定生物功能的生物大分子。其生物功能主要表現(xiàn)在:生命活動所需要的許多小分子物質和離子,是由蛋白質來運輸?shù)?生物的運動離不開蛋白質;生物體的防御系統(tǒng),用以防御致病微生物或病毒侵害而產生的抗體,也是一類高度專一的蛋白質,起到保護機體的作用,蛋白質含量的測定可以使用
凱氏定氮儀進行快速的測定分析。
勞里改良法(BCA法):又稱二喹啉甲酸(BCA)檢測法。這是近年來研制的一種改進Low ry法,反應簡單而且?guī)缀鯖]有干擾物質的影響。這種方法的原理[1]是在堿性環(huán)境下蛋白質分子中的肽鍵結構能與Cu2+絡合生成絡合物,同時將Cu2+還原成Cu+。而BCA試劑可敏感特異地與Cu+結合,形成穩(wěn)定的有顏色的復合物,在562nm處有高的吸收值。顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,可根據吸收值的大小來計算蛋白質的含量。此法的優(yōu)點是試劑單一,終產物穩(wěn)定,與Low ry法相比幾乎沒有干擾物質的影響。但是該方法的反應時間長,蛋白質也會發(fā)生不可逆的變性,而
定氮儀則是一種比較經典的測定方法,該方法在我國廣泛的推廣運用。Krystal發(fā)展了銀染色法測定微量蛋白質的方法,蛋白質樣品先用甘油醛處理,之后與銀氨溶液混合, 10分鐘后,加入硫代硫酸鈉終止反應,測定420nm的吸光度。該法的先行范圍為15- 2000ng,比Bradford法靈敏10倍。蛋白質銀復合物形成快,顯色穩(wěn)定,碳水化合物,非離子表面活性劑幾乎不干擾測定。BORA TYN SKY加入雙硫腙,A gCL與雙硫腙形成的不溶絡合物因蛋白質的存在而穩(wěn)定,在555nm測定吸光度。膠體金屬,如金、銀、鈀也與蛋白質作用,已被用于測定微量蛋白質。膠體金的測定波長為590nm,可以測定20ng的蛋白質;膠體鈀可測定100ng的牛血清蛋白,而強堿高濃度的鹽以及SDS有干擾,并且不同的蛋白質的信號有差別。
凱氏定氮儀:
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