無菌室一般是在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間??梢杂冒宀暮筒AЫㄔ臁C娣e不宜過大,約—平方米即可,高.米左右。無菌室外要設(shè)一個緩沖間,緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向,以免氣流帶進(jìn)雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。
..無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間,無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到級,室內(nèi)溫度保持在-℃,濕度保持在-%。超凈臺潔凈度應(yīng)達(dá)到級?! ?.無菌室應(yīng)保持清潔,嚴(yán)禁堆放雜物,以防污染?! ?.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染,已污染者應(yīng)停止使用?! ?.無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液,如%的甲酚溶液,%的酒精,.%的新潔爾滅溶液,等等?! ?.無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔,以保證無菌室的潔凈度符合要求?! ?.需要帶入無菌室使用的儀器,器械,平皿等一切物品,均應(yīng)包扎嚴(yán)密,并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌?! ?.工作人員進(jìn)入無菌室前,必須用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在緩沖間更換專用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用%的乙醇再次擦拭雙手),方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作?! ?.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌分鐘以上,并且同時打開超凈臺進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢,應(yīng)及時清理無菌室,再用紫外燈輻照滅菌分鐘。 ..供試品在檢查前,應(yīng)保持外包裝完整,不得開啟,以防污染。檢查前,用%的酒精棉球消毒外表面?! ?.每次操作過程中,均應(yīng)做陰性對照,以檢查無菌操作的可靠性。 ..吸取菌液時,必須用吸耳球吸取,切勿直接用口接觸吸管?! ?.接種針每次使用前后,必須通過火焰灼燒滅菌,待冷卻后,方可接種培養(yǎng)物?! ?.帶有菌液的吸管,試管,培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒,小時后取出沖洗。 ..如有菌液灑在桌上或地上,應(yīng)立即用%石碳酸溶液或%的來蘇爾傾覆在被污染處至少分鐘,再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時,應(yīng)立即脫去,高壓蒸汽滅菌后洗滌?! ?.凡帶有活菌的物品,必須經(jīng)消毒后,才能在水龍頭下沖洗,嚴(yán)禁污染下水道?! ?.無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下,取內(nèi)徑mm的無菌培養(yǎng)皿若干,無菌操作分別注入融化并冷卻至約℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約ml,放至凝固后,倒置于~℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)小時,證明無菌后,取平板~個,分別放置工作位置的左中右等處,開蓋暴露分鐘后,倒置于~℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)小時,取出檢查。級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過個菌落,級潔凈室平均不得超過個菌落。如超過限度,應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒,直至重復(fù)檢查合乎要求為止。