細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)置、設(shè)備和準(zhǔn)備工作一、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及設(shè)備(一)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無(wú)菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。目前,超凈工作臺(tái)的廣泛使用,很大程度上方便了組織細(xì)胞培養(yǎng)工作,并使一些常規(guī)實(shí)驗(yàn)室有可能用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作:無(wú)菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。
.無(wú)菌操作區(qū)
()無(wú)菌操作室:無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分:
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c) 無(wú)菌操作間—―專用于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過(guò)高(不超過(guò).m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無(wú)死角以便清潔和消毒。工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁,臺(tái)面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。無(wú)菌操作間的空氣消毒:紫外線燈—-產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康??諝膺^(guò)濾的恒溫恒濕裝置—-最好。表潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級(jí)別表潔凈度級(jí)別 塵粒最大允許數(shù)/立方米 微生物最大允許數(shù) 浮游菌/立方米 沉降菌/皿
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級(jí) ,, , - 無(wú)臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場(chǎng)作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng),從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的,消毒時(shí)沒(méi)有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需~min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。()凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。凈化工作臺(tái)工作原理(大致相同)—-通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區(qū),從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。